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淺談PCR實驗室環境污染的監控措施及規范化操作流程

時間:2020-01-22    點擊: 次    來源:抗非大家談    作者:王長年,趙俊娜 - 小 + 大

非瘟防控,豈容“烽火戲諸侯”?

——淺談PCR實驗室環境污染的監控措施及規范化操作流程

編者按:不以規矩,不能成方圓。實驗室環境污染的監控措施及規范化操作流程都是經過長期實踐、廣泛驗證的有效措施,我們只要高度重視、規范化操作就能大幅度降低管理中的風險。毫無疑問,實驗室的檢測、監測在防控非洲豬瘟方面起到了非常重要的作用!王長年、趙俊娜分享《非瘟防控,豈容“烽火戲諸侯”?——淺談PCR實驗室環境污染的監控措施及規范化操作流程》,推動實驗室標準化與規范化運行。

摘要:隨著非洲豬瘟(ASF)的來襲,國內熒光定量PCR實驗室如雨后春筍般地快速發展。熒光定量PCR方法已成為ASF防控過程中最常見的手段。我們通過調查發現:隨著檢測量的增加,各實驗室的環境污染問題日益突出。2019年初,仇華吉研究員多次在國內ASF防控會議上,從專家的角度呼吁大家在做ASF檢測和監測時,務必要防止實驗室本身所造成的污染問題。

自此,如何建立實驗室,如何防止實驗室的污染問題也逐漸引起了大家的關注和重視!我們通過與諸多實驗室共同地努力和不斷地優化,逐步建立了一套熒光定量PCR實驗室的環境污染監控和處理方法,分享給同行,供大家參考。

關鍵詞:PCR實驗室 環境污染 監控系統 SOP

熒光定量PCR技術在國內獸醫體系的大量應用,多半是為了防控非洲豬瘟(ASF)。所以很多實驗室都是為了應對ASF疫情而倉促上馬的,設計不合理、運行不規范,經常會出現實驗室污染問題;而這些問題往往未能得到足夠的重視,導致出現“陰性對照不成立、甚至出現假陽性”的錯誤結果。為有效地控制PCR實驗室污染,我們通過對實驗室的設計和布局、實驗室環境污染監控體系的建立以及相關問題的處置、人員的培訓等方面來提高PCR實驗室檢測水平。

實驗室的設計和布局

1.1 關于PCR實驗室的設計和布局

PCR實驗室設計的科學與合理是保證實驗結果準確的必備條件。我們常見一些實驗室由于在設計上的缺陷,導致實驗室的環境污染難以去除,甚至不能再進行PCR檢測或不愿意使用高敏感的試劑盒來檢測(“鴕鳥策略”)!

標準化的 PCR 實驗室設計最主要考慮的兩個方面:

1、各區獨立

2、注意風向

PCR實驗室的分區我們按照污染程度來劃分:可分為試劑準備區-核酸提取區- PCR擴增區,普通的PCR實驗室還有產物分析區,其污染程度依次增大。PCR實驗室各個相對獨立的區域內要做好正負壓的控制,簡易的實驗室可以安裝不同數量的排風扇來實現不同區域的壓差。嚴格分區還要注意實驗室內的空氣在不同區域的流向問題。我們要防止擴增產物順空氣氣流進入上游擴增前的 “潔凈” 區域。所以,實驗室科學的通風設計在去除氣溶膠污染方面是非常有幫助的!

1.2 PCR實驗室的設計中常見的一些錯誤

我們參觀和了解過許多實驗室,發現有些PCR實驗室的設計存在嚴重的問題。下面是一些常見的設計錯誤,希望能夠引起大家的注意。

1) 中央空調互通:這樣就造成實驗室各區域的互通,非常容易造成整個實驗室的污染,進而不能使用。所以,需要在各區域另行安裝分體式空調或者安裝PCR實驗室專用的分區通風系統。

2) 隔斷不密封:有些實驗室在分區設計時,只是考慮實驗室在形式上的分區(各區分割不完全,有相通之處;各區之間無緩沖間;或者即便有緩沖間,卻在裝修時采用家庭裝修模式-吊軌式推拉門或者平開門,門的下面留有縫隙等等)。

3) 傳遞窗不密封:如果傳遞窗不密封,雖然有時方便了試劑、物品在不同實驗區間的傳遞,但同時也增加了交叉污染的風險。一個合格的傳遞窗應是雙開門且密封嚴實,并且兩邊的門最好設置連鎖裝置控制(即一次只能開啟一扇門)。此外,傳遞窗內應配有紫外燈照射裝置,并在每次使用后立即進行照射。

實驗室環境污染的監控體系

建立以及相關問題的處置方法

2.1 PCR實驗室環境污染監控的重點

PCR實驗室環境污染監控和豬場環境監控的關注點是不一樣的。在實驗室層面,主要是關注產物和氣溶膠的核酸污染問題;而在豬場,則關注對病毒污染的監測。所以,我們對于PCR實驗室的監測關注點在重點區域和關鍵儀器設備方面。

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